瑞香素的生物活性和实验方法

发布时间:2018-10-19 12:04:32 编辑作者:活性小子

瑞香素图片

图片:瑞香素结构式

瑞香素是一种天然香豆素衍生物,是一种抑制EGFR(IC50:7.67μM),PKA(IC50:9.33μM)和PKC(IC50:25.01μM)的蛋白激酶抑制剂,也具有抗氧化和抗炎活性。它的靶点活性为EGFR,7.67μM;PKA,9.33μM;PKC,25.01μM。

一、瑞香素的生物活性详解:
1)体外活性
瑞香素(25-40 μM)对恶性疟原虫引起的次黄嘌呤掺入的抑制率可达50%。瑞香素(50 μM)可使细胞周期蛋白D1的水平降低。地塞米松可影响皮质神经从而降低细胞活性,瑞香素可剂量依赖地防止该作用。 瑞香素能以特殊的方式剂量依赖性地抑制内源或重组TaPRK的活性。瑞香素既对表皮细胞生长因子受体催化的外源底物酪氨酸磷酸化具有明显抑制作用,还对PKA和PKC的活性有抑制作用。瑞香素处理24 h对MCF-7雌激素应答的人类癌细胞系生长有抑制作用(IC50:73 μM)。瑞香素对ERK1/ERK2促有丝分裂的信号传导有抑制作用。

2)体内活性
在水迷宫测试和强迫游泳测试中,瑞香素(2-8 mg/kg)可增强应激小鼠的表现。 瑞香素(140 mg/kg)可使子宫重量减少39.5%。瑞香素可使P. yoelli感染小鼠的存活时间显着延长。

二、瑞香素的生物活性实验方法:
1)细胞实验
使用微量培养MTT测定估计测试的瑞香素对MCF-7肿瘤细胞的细胞抑制作用。 该测定基于活细胞的线粒体减少可溶性四唑盐。 将还原产物(不溶的紫色甲)溶解在二甲基亚砜中并用分光光度法(570nm)测量。 形成的福尔马赞量与活细胞数成正比。 将细胞(3×103)接种在96孔微孔板的每一个中,在含有相应浓度的瑞香素的200μL培养基中。 在五种浓度(12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM)下测试瑞香素。 在24小时,48小时和72小时暴露后,相对于溶剂处理的对照细胞估计处理细胞的增殖抑制百分比(PI%= [(T / C)-1]×100)。 PI =增殖抑制; T =处理,C =对照。 IC50由最小二乘浓度 - 响应回归计算。

2)激酶实验
蛋白激酶C(PKC)和cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)活性的测定:检测PKC和PKA活性。简言之,将5mL PKC或PKA与5mL含有100mM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯,2.8mg / mL磷脂酰丝氨酸和Triton X-100混合胶束的脂质制剂混合用于PKC测定或5mL 40mM用于PKA测定的50mM Tris-HCl,pH 7.5中的cAMP和5mL瑞香素。通过加入10mL含有250mM乙酰化髓鞘碱性蛋白,100mM ATP,5mM CaCl 2,10mM MgCl 2,20mM Tris-HCl,pH 7.5或含有200μlPKA的PKA底物溶液的PKC底物溶液开始反应。 mM Kemptide,400mM ATP,40mM MgCl 2,1mg / mL BSA,50mM Tris-HCl,pH 7.5和20-25mCi / mL [g-32P] ATP。在25℃温育5分钟后,将20mL每种混合物点在一片磷酸纤维素盘上,立即将其放入1%H 3 PO 4中。除去圆盘上游离的[g-32P] ATP后,在闪烁计数器中计数圆盘上掺入肽的32P。

参考文献:
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6. Finn GJ, et al. Biochem Pharmacol, 2004, 67(9), 1779-1788.

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