凡德他尼的生物活性_凡德他尼实验方法

发布时间:2018-10-18 20:57:45 编辑作者:活性小子

凡德他尼图片

图片:凡德他尼结构式

凡德他尼是一种癌症药物,可以干扰体内癌细胞的生长和扩散,用于治疗甲状腺癌。

一、凡德他尼的生物活性详解:
1)体外活性
凡德他尼抑制VEGFR3和EGFR,IC50分别为110 nM和500 nM。凡德他尼对PDGFRβ,Flt1,Tie-2和FGFR1不敏感,IC50为1.1-3.6μM,而对ICK,CDK2,c-Kit,erbB2,FAK,PDK1,Akt和IGF-1R几乎没有活性,IC50高于10μM。 凡德他尼抑制VEGF,EGF和bFGF刺激的HUVEC增殖,IC50为60 nM,170 nM和800 nM,对基底内皮细胞生长无影响。 凡德他尼抑制肿瘤细胞生长,IC50为2.7μM(A549)至13.5μM(Calu-6)[1]。与同一试验中的Cat S抑制剂LHVS(IC50 =0.001μM)相比,Odanacatib是抗原呈递的弱抑制剂,在小鼠B细胞系中测量(IC50 = 1.5±0.4μM)。与LHVS相比,Odanacatib还显示对小鼠脾细胞中MHC II恒定链蛋白Iip10的加工的抑制作用较弱(最小抑制浓度分别为1-10μM和0.01μM)[2]。 凡德他尼抑制HUVEC中VEGFR-2的磷酸化和肝癌细胞中EGFR的磷酸化并抑制细胞增殖[4]。

凡德他尼抑制VEGF-,EGF- 和 bFGF-刺激的HUVEC增殖,IC50分别为60 nM,170 nM和800 nM,而对基底内皮细胞生长几乎没有作用效果。凡德他尼也抑制VEGFR3和EGFR,IC50分别为110 nM 和500 nM。凡德他尼抑制肿瘤细胞生长,IC50为2.7 μM (A549) 到13.5 μM (Calu-6)。凡德他尼抑制basal ABCG2-ATP酶。EGFR抑制剂处理A431细胞,降低pEGFR水平,而凡德他尼处理时,抑制效果温和。凡德他尼抑制PC3wt和PC3R细胞系,IC50分别为13.3 μM和11.5 μM。凡德他尼抑制肝癌细胞中HUVEC和EGFR中VEGFR2的磷酸化并抑制细胞增殖。凡德他尼导致GEO和OVCAR-3细胞中G0-G1期细胞的积累,并增加OVCAR-3,ZR-75-1,MCF-10A ras和GEO细胞的凋亡。凡德他尼作用于有功能性EGFR但是缺失VEGFR-2的人类细胞系 (乳腺,结肠,胃和卵巢),抑制软琼脂生长,这种作用具有剂量依赖性。凡德他尼在小鼠NIH-EGFR成纤维细胞和人MCF-10A ras乳腺癌细胞(过表达人EGFR的两种细胞系)中引起EGFR磷酸化的剂量依赖性抑制。

2)体内活性
凡德他尼(15 mg / kg,p.o。)在H1650异种移植模型中具有优于吉非替尼的抗肿瘤效果,并抑制肿瘤生长,IC50为3.5±1.2μM[3]。 在荷瘤小鼠中,凡德他尼(50或75 mg / kg)抑制肿瘤组织中VEGFR-2和EGFR的磷酸化,显着降低肿瘤血管密度,增强肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,提高存活率,减少肝内转移的数量 ,并在肿瘤组织中上调VEGF,TGF-α和EGF [4]。

PC3R异种移植物中,低剂量凡德他尼(25 mg/kg)相对于对照没有明显作用,而高剂量(50 mg/kg)与对照相比显着抑制肿瘤生长。相反,凡德他尼 50 mg/kg 和Docetaxel 30 mg/kg 按高剂量联用作用于PC3R细胞,显示明显的负相互作用。在荷瘤小鼠中,凡德他尼抑制肿瘤组织中VEGFR2和EGFR的磷酸化,显着降低肿瘤血管密度,增强肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,提高存活率,减少肝内转移瘤数量,并上调VEGF,TGF-α和EGF在肿瘤组织中的表达。凡德他尼作用于携带GEO结肠癌移植瘤(对EGFR信号受抑制敏感)的裸鼠,剂量依赖性抑制肿瘤生长。静脉注射2.5 mg/kg 凡德他尼逆转 63%血管内皮生长因子诱导的低血压,但是不会明显影响bFGF诱导的低血压。100 mg/kg 凡德他尼抑制79%肿瘤诱导的血管形成。

二、凡德他尼的生物活性实验方法:
1)细胞实验
通过改良的MTT测定法测量生长抑制。 简而言之,将细胞以每孔2000个细胞的密度接种在96孔板上,并暴露于每个吉非替尼或凡德他尼72小时。 每个测定一式三份进行。 将每种药物的50%抑制浓度(IC 50)确定为平均值±标准偏差(SD)。

2)动物实验
将100万个H1650细胞或H1650 / PTEN细胞(具有转染的PTEN基因的H1650细胞)皮下注射到每只小鼠的背部。 在注射后第10天,将小鼠随机分配至三组,其接受载体,凡德他尼(15mg / kg /天)或吉非替尼(15mg / kg /天)。 车辆,凡德他尼和吉非替尼每天口服给药一次,每周五次。 定期测定肿瘤体积(宽×宽×长/ 2)和体重。 肿瘤体积表示为平均值±SD。 使用Student's t检验评估肿瘤体积的差异。

3)激酶实验
激酶抑制:将凡德他尼与酶,10mM MnCl 2和2μMATP在涂有聚(Glu,Ala,Tyr)6:3:1无规共聚物底物的96孔板中温育。然后通过与小鼠IgG抗磷酸酪氨酸4G10抗体,辣根过氧化物酶连接的绵羊抗小鼠免疫球蛋白抗体和2,2'-连氮基 - 双(3??-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)的连续温育来检测磷酸化酪氨酸。该方法适用于检测与EGFR,PDGFRβ,Tie-2,FGFR1,c-kit,erbB2,IGF-1R和FAK相关的酪氨酸激酶的选择性。所有酶测定(酪氨酸或丝氨酸 - 苏氨酸)在相应的Km(0.2-14μM)或恰好低于相应的Km(0.2-14μM)时使用适当的ATP浓度。使用相关的闪烁亲近测定法(SPA)在96孔板中检查选择性与丝氨酸 - 苏氨酸激酶(CDK2,AKT和PDK1)的关系。 CDK2检测包含10 mMMnCl2,4.5μMATP,0.15μCi[γ-33 P] ATP /反应,50 mM HEPES(pH 7.5),1 mM DTT,0.1 mM原钒酸钠,0.1 mM氟化钠,10 mM甘油磷酸钠,1mg / mL BSA级分V和视网膜母细胞瘤基质(视网膜母细胞瘤基因的一部分,792-928,在谷胱甘肽S-转移酶表达系统中表达;0.22μM终浓度)。使反应在室温下进行60分钟,然后用150μL含有EDTA(62mM终浓度),3μg兔免疫球蛋白抗谷胱甘肽S-转移酶抗体和蛋白A SPA-聚乙烯基甲苯的溶液淬灭2小时。珠子(0.8mg /反应)。然后将板密封,离心(1200×g,5分钟),并在Microplate闪烁计数器上计数30秒。

综上所述:凡德他尼是一种有效的 VEGFR2 抑制剂,IC50 值为 40 nM。它的靶点活性为EGFR,500nM;VEGFR2,40nM;VEGFR3,110nM。

参考文献:
[1]. Wedge SR, et al. ZD6474 inhibits vascular endothelial growth factor signaling, angiogenesis, and tumor growth following oral administration. Cancer Res. 2002 Aug 15;62(16):4645-55.
[2]. Hegedus C, et al. Interaction of the EGFR inhibitors gefitinib, vandetanib, pelitinib and neratinib with the ABCG2 multidrug transporter: implications for the emergence and reversal of cancer drug resistance. Biochem Pharmacol. 2012 Aug 1;84(3):260-7.
[3]. Takeda H, et al. Vandetanib is effective in EGFR-mutant lung cancer cells with PTEN deficiency. Exp Cell Res. 2013 Feb 15;319(4):417-23.
[4]. Inoue K, et al. Vandetanib, an inhibitor of VEGF receptor-2 and EGF receptor, suppresses tumor development and improves prognosis of liver cancer in mice. Clin Cancer Res. 2012 Jul 15;18(14):3924-33.

相关化合物:凡德他尼

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